HCV-RNA: Kỹ thuật mới trên hệ thống QIA-GEN | Medlatec

HCV-RNA: Kỹ thuật mới trên hệ thống QIA-GEN

Ngày 21/10/2014 ThS. Trịnh Thị Quế, Khoa Xét nghiệm, BV MEDLATEC

Virus viêm gan C (HCV) thuộc họ Flaviviridae, giống Hepacivirus. Cấu trúc phân tử HCV RNA virus bao gồm một khung đọc mở duy nhất (ORF - open reading frame) bao trùm cấu trúc gen của HCV mã hoá một chuỗi polypeptide khoảng 3010 - 3033 aminoacid (aa) gắn kết vào đầu 5’ và 3’ của các vùng không dịch mã (UTR - Untranslated region).


Gen của virus chia làm 3 vùng chính có hai đầu 5’ và 3’.

Khởi đầu, khung đọc mở ở vùng 5’ không phiên mã (HCV5 - UTR) gồm 341 nucleotide là vùng bảo tồn nhất trong cấu trúc gen của HCV, 90% cấu trúc hoàn toàn tương tự nhau ở các kiểu gen HCV khác nhau và thường được sử dụng trong chẩn đoán sinh học phân tử.

Tiếp theo, là những vùng mã hoá cho các protein cấu trúc và protein không cấu trúc, vùng cấu trúc (structural region) gồm các gen mã hoá cho các protein capside (C - core) và lớp bao ngoài (E1 và E2 - envelope). Vùng không cấu trúc (none structural region) nằm ở phía 3 của vùng cấu trúc.

Cuối cùng, vùng 3 không phiên mã (HCV 3 - UTR) có khoảng 27 - 66 nucleotid, có chức năng báo hiệu dừng quá trình phiên mã [1].

 
 

Quy trình định lượng HCV gồm 3 bước chính: (1) Tách chiết RNA virus từ mẫu bệnh phẩm; (2) Chuyển RNA thành cDNA; (3) Định lượng bằng kỹ thuật real-time PCR [2].


HCV có vật liệu di truyền là sợi đơn RNA không bền, dễ bị phân huỷ bởi enzyme RNase hiện diện rất nhiều trong mẫu cũng như trong môi trường. Việc định lượng HCV cho kết quả chính xác khó khăn hơn các virus có vật liệu di truyền là DNA, ví dụ HBV. Vấn đề kỹ thuật lớn nhất cần giải quyết đó là việc thao tác với vật liệu di truyền RNA bị ảnh hưởng bởi rất nhiều yếu tố khách quan cũng như chủ quan từ con người.

Để  thực hiện xét nghiệm HCV-RNA, Bệnh viện Đa khoa MEDLATEC đã trang bị các hệ thống sinh học phân tử như IQ5 Multicolor Real- time PCR, Cobas Taqman 48 (Roche), đặc biệt, Bệnh viện đã đầu tư và đưa vào hoạt động hệ thống tự động QIAsymphony SP/AS/RGQ của hãng Qiagen (Đức).


Hệ thống QIAsymphony SP/AS/RGQ tự động hoàn toàn từ việc chuẩn bị mẫu, thiết lập phản ứng đến phân tích kết quả. Hệ thống còn đạt tiêu chuẩn chất lượng châu Âu và chứng chỉ dành cho chẩn đoán (CE-IVD).

Bộ kit định lượng (Artus HCV QS RGQ Kit - Qiagen) đã được cấp chứng chỉ IVD. Bộ kit được thiết kế trên vùng gene 5' UTR, đây là vùng bảo tồn cao của HCV, cho phép phát hiện tất cả các genotype HCV đã được công bố hiện nay (Genotype 1, 2, 3, 4, 5, 6) [3].

Quy trình định lượng được thực hiện với thể tích mẫu lên tới 1ml huyết thanh, huyết tương. Các hệ thống tự động khác thường sử dụng lượng mẫu nhỏ hơn 1ml [4].

Độ nhạy của hệ thống này rất cao đạt tới 21 IU/ml, tương đương với khoảng 25 copies/ml (1IU = 1.21 copies/ml). Thử nghiệm với 60 mẫu có tải lượng virus nhỏ hơn 20 IU/ml cho tỉ lệ dương tính rất cao. Trên 80% các mẫu có tải lượng virus 15 IU/ml và gần 70% các mẫu có tải lượng virus 5 IU/ml vẫn có thể phát hiện được [3].

Tài liệu tham khảo


1. Rogo, L.D., Akogwu, S., Umar, U. Z., Aliyu, A.M. and Aminu, B. M (2001) Bayero Journal of Pure and Applied Sciences, 4(1): 72 – 74.

2. Phạm Hùng Vân., 2008, PCR và Realtime PCR các vấn đề cơ bản và các ứng dụng thường gặp. Nhà xuất bản Y học.

3. Qiagen GmbH Inc., 2012. Artus® HCV QS-RGQ Kit Handbook

4. Roche Molecular System Inc. 2008. COBAS AmpliPrep/COBAS taqman HCV test package insert.

 

Chương trình khám phát hiện bệnh lý về phổi

Đăng ký khám, tư vấn

Tại sao nên chọn bệnh viện đa khoa MEDLATEC

Bệnh viện đa khoa nhiều năm kinh nghiệm.
Đội ngũ giáo sư, bác sĩ đầu ngành
Đội ngũ giáo sư, bác sĩ đầu ngành
Cơ sở vật chất hiện đại
Áp dụng thanh toán bảo hiểm y tế lên tới 100%
Quy trình khám chữa bệnh nhanh chóng
Chi phí khám chữa bệnh hợp lý.

Tin cùng chuyên mục

Khám sức khỏe cho người nước ngoài quy trình như thế nào, ở đâu mới tốt?

Khám sức khỏe cho người nước ngoài quy trình như thế nào, ở đâu mới tốt?

Những cư dân không có quốc tịch Việt Nam muốn đủ điều kiện sức khỏe để làm việc tại nước ta cần phải có giấy khám sức khỏe cho người nước ngoài. Vậy họ sẽ phải trải qua quy trình khám như thế nào và đến đâu để khám, câu trả lời sẽ có ngay trong bài viết dưới đây.
Ngày 22/10/2019
Chủ quan sưng tay không đi khám, bệnh nhân mắc u tế bào khổng lồ tại vị trí ít gặp

Chủ quan sưng tay không đi khám, bệnh nhân mắc u tế bào khổng lồ tại vị trí ít gặp

U tế bào khổng lồ thường gặp ở đầu dưới xương đùi, đầu trên xương chày và đầu dưới xương cùng và xương quay. Tuy nhiên, ở bệnh nhân L.T.H, 35 tuổi, nữ (Giảng Võ, Hà Nội) tuổi đến khám tại Bệnh viện Đa khoa MEDLATEC thấy khối u này ở vị trí ít gặp.
Ngày 21/10/2019
Dành tặng món quà ý nghĩa cho những người phụ nữ yêu thương

Dành tặng món quà ý nghĩa cho những người phụ nữ yêu thương

Từ ngày 05/09/2019 đến 31/12/2019, Bệnh viện Đa khoa MEDLATEC triển khai chương trình ưu đãi lên đến 20% dịch vụ xét nghiệm tại nhà lên đến. Đây là món quà sức khỏe ý nghĩa dành tặng các gia đình và đặc biệt là những người phụ nữ bạn yêu thương.
Ngày 21/10/2019
Tư vấn về địa chỉ khám sức khỏe du học ở đâu tốt và chất lượng nhất

Tư vấn về địa chỉ khám sức khỏe du học ở đâu tốt và chất lượng nhất

Chắc hẳn, với các bạn trẻ, du học là con đường mới mở ra nhiều cơ hội hơn trong học tập. Và khám sức khỏe chính là thủ tục bắt buộc khi chuẩn bị hồ sơ du học. Quy trình thăm khám bao gồm kiểm tra tổng quát đến tiêm chủng và khám chuyên khoa. Vậy nên đi khám sức khỏe du học ở đâu để sở hữu dịch vụ hàng đầu? 
Ngày 17/10/2019
hotline 1900 5656561900 565656